AVB100是否会在含有抗生素的LB平板上生长？

如果存在任何抗生素，未转化的细胞将不会生长。这些细胞不具有任何抗生素抗性，除非用质粒转化（例如，具有氨苄青霉素抗性的pAN载体）。

为什么我无法用我选择的质粒转化这些细胞？

AVB100没有资格。请使用已建立的协议使其具有竞争力或购买具有电子功能的AVB100电池（称为EVB100）。AVB101-大肠杆菌B菌株可实现有效的体内生物素化
 

哪些载体与AVB101兼容？

当今实验室中使用的大多数表达载体均来自colE1质粒，该质粒包括pBR322，pUC，pGEM，pBAD，并且与AVB101兼容。如果要避免使用两个质粒系统，也可以使用AVB100，其中BirA在细菌染色体上编码，并通过阿拉伯糖启动子表达。在最初的过夜培养中使用BIP-300质粒时，为什么不将氯霉素添加到生长/诱导培养基中来维持BIP-300质粒？（仅在将AVB101大肠杆菌用作宿主菌株时相关）

我们发现氯霉素在这一点上对于维持pBirAcm BirA过表达质粒不是必需的。由于副本数量少，因此可以很好地维护它。
 

 

我必须使用哪种抗生素？

请使用浓度为10μg/ ml的氯霉素来维持质粒。为什么我的质粒制备物收率低？

这是一个低拷贝数的质粒。请使用诸如TYH或TB之类的富培养基，并使用较大体积的培养基（微量制备需5-10毫升）以增加质粒产量。

BIO-200生物素溶液
 

我是否需要与BirA 500 / Bulk BirA反应试剂盒分开购买BIO-200500μMd-生物素溶液？

通常不会。两种试剂盒均随附已包含的BIO-200小瓶。另外，试剂盒中包含的BiomixB含有足够的d-生物素，可用于典型的BirA生物素-蛋白质连接酶反应。如果需要，可以添加其他d-生物素，但通常不是必需的。
 

 

BIO-500是否无菌？

是。在包装之前，将BIO-500 d-生物素溶液通过0.22μm过滤器进行无菌过滤。

BIP-300-诱导阳性对照质粒
 

您的载体在T7启动子表达系统上起作用吗？

不能。BIP-300阳性对照质粒（和pAN / pAC载体）在Trc启动子上起作用。在最初的过夜培养中使用BIP-300质粒时，为什么不将氯霉素添加到生长/诱导培养基中来维持BIP-300质粒？（仅在将AVB101大肠杆菌用作宿主菌株时相关）

我们发现氯霉素在这一点上对于维持pBirAcm BirA过表达质粒不是必需的。由于副本数量少，因此可以很好地维护它。

BirA500-RT：BirA生物素蛋白连接酶冻干反应试剂盒
 

BirA是否包含亲和纯化标签，例如His-tag？

否。我们的BirA是通过大肠杆菌的传统蛋白质纯化方法纯化的野生型。以这种方式纯化的无融合标签的BirA是最活跃的。
 

BirA酶的分子量是多少？

33.5 kDa。

BirA500：BirA生物素蛋白连接酶标准反应试剂盒
 

BirA是否包含亲和纯化标签，例如His-tag？

否。我们的BirA是通过大肠杆菌的传统蛋白质纯化方法纯化的野生型。以这种方式纯化的无融合标签的BirA是最活跃的。
 

 

 

MBP-AviTag融合蛋白的氨基酸序列是什么？

下面提供了该序列。

MKTEEGKLVIWINGDKGYNGLAEVGKKFEKDTGIKVTVEHPDKLEEKFPQVAATGDGPDIIFWAHDRFGGYAQSGLLA

EITPDKAFQDKLYPFTWDAVRYNGKLIAYPIAVEALSLIYNKDLLPNPPKTWEEIPALDKELKAKGKSALMFNLQEPYFTW

PLIAADGGYAFKYENGKYDIKDVGVDNAGAKAGLTFLVDLIKNKHMNADTDYSIAEAAFNKGETAMTINGPWAWSNI

DTSKVNYGVTVLPTFKGQPSKPFVGVLSAGINAASPNKELAKEFLENYLLTDEGLEAVNKDKPLGAVALKSYEEELAKDPR

IAATMENAQKGEIMPNIPQMSAFWYAVRTAVINAASGRQTVDEALKDAQTNSSS GSLSTPPTPSPSTPPT GLNDIFEA QKIEWHE

颜色图例：MBP IgA铰链连接器AviTag

批量BirA-RT：BirA生物素蛋白连接酶批量冻干反应试剂盒
 

BirA是否包含亲和纯化标签，例如His-tag？

否。我们的BirA是通过大肠杆菌的传统蛋白质纯化方法纯化的野生型。以这种方式纯化的无融合标签的BirA是最活跃的。
 

 

 

我需要多少BirA才能生物素化AviTag'd蛋白？

这个问题的长答案是每10 nmol底物（在最终反应混合物中浓度为40uM），我们建议使用2.5ug BirA酶在30-40分钟内完成生物素化。在30°C下。简短的答案是我们建议每100ug AviTag'd肽/蛋白质中约含1ug BirA，以获得良好的生物素化速率。酶动力学复杂，因为较低的生物素化底物浓度（或较低的BirA浓度）会大大增加反应时间。例如，在40uM底物可能需要30分钟才能完成生物素化的情况下，使用相同量的BirA，4uM底物浓度可能需要5个小时。最佳反应条件将由各个用户确定。